DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-NEURONALES:
| Anticuerpo | Muestra (1-2 ml) | Técnica de cribaje | Técnica de confirmación |
| 1.- Ac. Onconeuronales marcadores de enfermedad paraneoplásica. | |||
| Hu | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| Yo | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| Ri | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| CV2 (CRMP5) | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| Ma1/Ma2 | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| Anfifisina | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| Tr (DNER) | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot/ CBA* |
| Recoverina | Suero | NA | Inmunoblot |
| ZIC4 | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| SOX1 | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| 2.- Ac. contra antígenos intracelulares no onconeuronales. | |||
| GAD | Suero / LCR | Immunohistoquímica | RIA |
| AK5 | Suero / LCR | Immunohistoquímica | CBA* |
| 3.- Ac. contra antígenos de superficie. | |||
| NMDAR | Suero / LCR | Immunohistoquímica | CBA* |
| AMPAR | Suero / LCR | Immunohistoquímica | CBA* |
| LGI1 | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| CASPR2 | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| GABABR | Suero / LCR | Immunohistoquímica | CBA* |
| GABAAR | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| GlicinaR | Suero / LCR | NA | CBA* |
| mGluR1 | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| mGluR5 | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| DPPX | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| IgLON5 | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| Neurexina 3α | Suero / LCR | Inmunohistoquímica | CBA* |
| Dopamina 2R | Suero / LCR | NA | CBA* |
| 4.- Ac. asociados al espectro clínico de enfermedades/síndromes desmielinizantes y astrocitopatías. | |||
| IgG NMO/AQP4 | Suero / LCR | NA | CBA* |
| IgG MOG | Suero / LCR | NA | CBA* |
| GFAP | Suero / LCR | Immunohistoquímica | CBA* |
| 5.- Ac. asociados a gammapatía monoclonal IgM | |||
| IgM MAG | Suero | NA | Inmunoblot |
| 6.- Ac. poco frecuentes asociados a ataxias cerebelosas. | |||
| Homer-3 | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| CARP VIII | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
| PKCγ | Suero / LCR | Immunohistoquímica | Inmunoblot |
*CBA: cell-based assay (immunocitoquímica sobre células HEK transfectadas con el antígeno).
NA: No aplicable.
1. Anticuerpos onconeurales marcadores de enfermedad neurológica paraneoplásica:
- Anti-Hu. Neuropatías sensitivas, encefalitis límbicas, degeneración cerebelosa, cuadros multifocales (encefalomielitis) asociados preferentemente a cáncer de pulmón.
- Anti-Yo. Degeneración cerebelosa asociada a cánceres de mama y ovario.
- Anti-Ri. Encefalitis de tronco y opsoclono asociados a cánceres de ovario y mama.
- Anti-CV2: Espectro parecido a anti-Hu
- Anti-Ma1/2: Encefalitis límbica y cáncer de testículo.
- Anti-anfifisina. Síndrome de Stiff-person (persona rígida) paraneoplásico asociado a la neoplasia de mama o espectro parecido a anti-Hu si asociado a cáncer de pulmón.
- Anti-Tr (DNER). Degeneración cerebelosa asociada a la enfermedad de Hodgkin.
- Anti-recoverina. Retinopatía asociada a cáncer de pulmón.
- Anti-ZIC: Degeneración cerebelosa paraneoplásica
- Anti-SOX1(AGNA): Enfermedad de Eaton-Lambert paraneoplásica asociada a cáncer de pulmón
2. Anticuerpos contra antígenos intracelulares no onconeurales:
- Anti-GAD: Síndromes de Stiff-person (persona rígida) o ataxia cerebelosa no paraneoplásicos. Epilepsia. Encefalitis límbica
- Anti-AK5: Encefalitis límbica.
3. Anticuerpos contra antígenos de superficie:
- Anti-NMDAR: Encefalitis asociada a teratoma de ovario (30%) o idiopática (70%)
- Anti-AMPAR: Encefalitis límbica asociada a cáncer pulmón, timoma, mama (70%) o idiopática (30%)
- Anti-LGI1: (antes anti-canales de potasio). Asociados a encefalitis límbica idiopática o casos de epilepsia.
- Anti-CASPR2: (antes anti-canales de potasio). Asociados a síndrome de Morvan, algunos casos de neuromiotonía y encefalitis límbica idiopática.
- Anti-GABABR: Encefalitis límbica asociada a cáncer pulmón (60%) o idiopática (40%)
- Anti-GABAAR: Encefalitis idiopática/status epiléptico
- Anti-receptor de glicina: pacientes con síndrome de la persona rígida y encefalomielitis progresiva con rigidez y mioclonus.
- Anti-mGluR1: síndrome cerebeloso asociado, o no, a enfermedad de Hodgkin
- Anti-mGluR5: encefalitis límbica asociada a enfermedad de Hodgkin
- Anti-DPPX: encefalitis idiopática con cuadros de hiperexcitabilidad, hyperekplexia, y cuadros similares a encefalomielitis progresiva con rigidez y mioclonus.
- Anti-IgLON5: parasomnia NREM, apneas, alteración de la marcha
- Anti-Neurexina 3α: confusión, convulsiones. Encefalitis.
- Anti-Dopamina 2R: Parkinsonismo, distonía, síntomas psiquiátricos. Encefalitis de ganglios basales
4. Anticuerpos asociados al espectro clínico de enfermedades/síndromes desmielinizantes:
- Anti-IgG-NMO/AQP4: Neuromielitis óptica y formas limitadas (mielitis transversa longitudinalmente extensa, neuritis óptica recurrente).
- Anti-IgG-MOG: Neuritis óptica, mielitis transversa longitudinalmente extensa.
- Anti-GFAP: meningoencefalitis.
5. Ac. poco frecuentes asociados a ataxias cerebelosas:
- Anti-Homer3: no asociados a neoplasias.
- Anti- CARP VIII: degeneración cerebelosa paraneoplásica.
- Anti- PKCγ: degeneración cerebelosa asociada a Ca de pulmón.
6. Ac. asociados a gammapatía monoclonal IgM:
- Anti IgM-MAG: Neuropatía periférica asociada a gammapatía monoclonal IgM (Macroglobulinemia de Waldenström, MGUS).
DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CREUTZFELDT-JACKOB
| Diagnóstico de la enfermedad de Creutzfeldt-Jackob | ||
| Prueba | Muestra (1-2 ml) | Técnica |
| Proteína 14-3-3 | LCR | ELISA |
| Conversión de PrP en tiempo real | LCR | RT-QuIC |
| Secuenciación gen PRNP | Sangre (EDTA, Citrato) | Sec. Sanger |
Test de proteína 14-3-3
La presencia de la proteína 14-3-3 en líquido cefalorraquídeo de acuerdo con la técnica publicada por Hsich et al (N Eng J Med 1996;335:924), en un contexto clínico compatible, se asocia de forma sensible (93,4%) y la específica (91,5%) a la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) esporádica.
Remitir 1 ml de LCR (no hemático) en fresco (no hace falta refrigerar).
Conversión de PrP en tiempo real
El ensayo de conversión de proteína priónica inducida por agitación en tiempo real (RT-QUIC) es útil para el diagnóstico de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ). El principio de la técnica se basa en la capacidad que tiene la proteína priónica anómala PrPSc de inducir el plegamiento erróneo de proteína PrP recombinante. La agregación es propiciada mediante calor y movimiento. La Tioflavina THT se une a la proteína agregada y emitiendo fluorescencia. La cantidad de proteína agregada es proporcional a la fluoresceína emitida (excitación 450 nm y emisión a 480 nm).
En el caso de ECJ, el ensayo tiene una sensibilidad de 91% y una especificidad de 98%. Se ha descrito que es capaz de detectar hasta ≥ 1fg de PrPSc en una muestra.
Estudio del gen de proteína priónica (PRNP)
Caracterización del polimorfismo del codon 129 del gen de PRNP. Cribaje de mutaciones.
Remitir muestras en fresco (no hace falta refrigerar) junto a consentimiento informado para estudio genético firmado.
Sangre entera : 20ml en CITRATO como anticoagulante (no EDTA, no heparina)
¿Qué tipo de muestra se debe enviar? Todos los anticuerpos se pueden determinar en suero o LCR pero los casos de sospecha de anticuerpos contra antígenos de superficie y encefalitis se recomienda enviar LCR. Se pueden enviar las muestras a temperatura ambiente, pero se deben enviar por mensajero, ya que tienen que estar en el laboratorio en menos de 24 horas tras la extracción. Para la detección de la proteína 14-3-3 y Conversión de PrP en tiempo real se requiere LCR.
¿Qué se debe de enviar junto con la muestra?
1. Adjuntar autorización firmada y sellada por la Dirección Médica de su centro hospitalario indicando el nombre del paciente, la prueba solicitada, el tipo de muestra enviada, nombre del facultativo y servicio solicitante junto con el número de fax o correo electrónico para enviarles el informe de resultados, así como el número de teléfono para contactar con ustedes en caso necesario.
2. Consentimiento Informado firmado conforme la muestra se puede almacenar si se considera de interés para estudios posteriores en la investigación de anticuerpos antineuronales. La disponibilidad de la muestra es importante para poder realizar re-análisis como consecuencia de la implementación de nuevas técnicas diagnósticas (ej. SOX1 Neurology 2008; 70:924 o nuevas reactividades en pacientes con encefalitis límbica Neurology 2008; 71:930), producto de la actividad investigadora de nuestro laboratorio. En caso de no disponer del consentimiento y de acuerdo con la legislación actual, estamos obligados a eliminar esa muestra. Se adjunta el modelo de Consentimiento Informado.
3. Breve informe clínico para orientar el tipo de anticuerpo a determinar. Esta información es imprescindible para realizar las técnicas sobre células (CBA) aunque el estudio de cribado haya sido negativo. Este análisis se realizará sin coste añadido al de la técnica convencional pero sólo si se dispone de la información clínica necesaria. En el caso de NMO y formas limitadas de la enfermedad, se adjunta el modelo de información requerida.
Coste de las pruebas
El precio del cribado es de 136.5 €. El precio es igual para todos los anticuerpos si pide uno o varios. Si uno de los anticuerpos se ha de detectar por otra técnica entonces se cobrarán dos determinaciones. Las pruebas de confirmación para los casos que lo requieran se harán sin coste añadido.
El precio de la determinación de la proteína 14-3-3 es de 181 €.
El precio de la conversión de PrP en tiempo real es de 240€
Dónde se deben enviar las muestras:
Recepción de muestras CDB
Interpabellón 9-11, 1er piso
Hospital Clínic
C/Villarroel 170
08036 Barcelona
Tel: 93 227 54 64 · Fax: 93 227 98 75
Email: Esta dirección de correo electrónico está siendo protegida contra los robots de spam. Necesita tener JavaScript habilitado para poder verlo.
www.hospitalclinic.org
Persona de contacto Servicio de Inmunología:
Raquel Ruiz García, PhD
Servei d’Immunologia, CDB
Hospital Clínic de Barcelona
C/Villaroel 170, Esc. 4-Pl. 0
08036 Barcelona (Spain)
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Tel. +34-93 227 54 63 (Ext. 4115); +34 617304306;
Fax. +34-93 451 80 38
Persona de contacto Neuroimmunologia clínica i experimental IDIBAPS:
María Rodés
Centre de Recerca Biomèdica CELLEX
Laboratori de Neuroimmunologia. P3A
IDIBAPS
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Telf: 93 227 17 38
Fax: 93 227 17 26